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       染色質(zhì)免疫共沉淀(CHIP) 威斯騰生物—科研合作/成果轉(zhuǎn)化,行業(yè)標(biāo)桿!
       
      威斯騰生物——科研合作/成果轉(zhuǎn)化,行業(yè)標(biāo)桿!
      原理
      真核生物的基因組DNA以染色質(zhì)的形式存在。因此,研究蛋白質(zhì)與DNA在染色質(zhì)環(huán)境下的相互作用是闡明真核生物基因表達(dá)機(jī)制的基本途徑。染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)(chromatin immunoprecipitation assay, CHIP)是目前唯一研究體內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用的方法。
      CHIP基本原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物,并將其隨機(jī)切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段,然后通過免疫學(xué)方法沉淀此復(fù)合體,特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA片段,通過對(duì)目的片斷的純化與檢測,從而獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。
      CHIP不僅可以檢測體內(nèi)反式因子與DNA的動(dòng)態(tài)作用,還可以用來研究組蛋白的各種共價(jià)修飾與基因表達(dá)的關(guān)系。而且,CHIP與其他方法的結(jié)合,擴(kuò)大了其應(yīng)用范圍:CHIP與基因芯片相結(jié)合建立的CHIP-on-chip方法已廣泛用于特定反式因子靶基因的高通量篩選;CHIP與體內(nèi)足跡法相結(jié)合,用于尋找反式因子的體內(nèi)結(jié)合位點(diǎn);RNA-CHIP用于研究RNA在基因表達(dá)調(diào)控中的作用。由此可見,隨著CHIP的進(jìn)一步完善,它必將會(huì)在基因表達(dá)調(diào)控研究中發(fā)揮越來越重要的作用。
       
      ChIP的一般流程
      甲醛處理細(xì)胞---收集細(xì)胞,超聲破碎---加入目的蛋白的抗體,與靶蛋白-DNA復(fù)合物相互結(jié)合---加入ProteinA,結(jié)合抗體-靶蛋白-DNA復(fù)合物,并沉淀---對(duì)沉淀下來的復(fù)合物進(jìn)行清洗,除去一些非特異性結(jié)合---洗脫,得到富集的靶蛋白-DNA復(fù)合物---解交聯(lián),純化富集的DNA-片斷---PCR分析。
       
      染色質(zhì)免疫共沉淀/CHIP /整體實(shí)驗(yàn)
      威斯騰生物——科研合作/成果轉(zhuǎn)化,行業(yè)標(biāo)桿!
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